普通RT-PCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物有什么區(qū)別？特殊RT-PCR是半定量的。。即要從條帶的亮度判斷量的要比多少。。熒光定量PCR是定量的。。只不過(guò)兩者反應(yīng)體系，那些要求有很小區(qū)別，引物大多數(shù)不能

普通RT-PCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物有什么區(qū)別？

特殊RT-PCR是半定量的。。即要從條帶的亮度判斷量的要比多少。。

熒光定量PCR是定量的。。

只不過(guò)兩者反應(yīng)體系，那些要求有很小區(qū)別，引物大多數(shù)不能不能通用。除了上面說(shuō)過(guò)的熒光定量PCR產(chǎn)物要壓制在60-200nt之間，退火溫度也比較高。。像是要提升60度

pcr熒光信號(hào)怎么收集？

Pcr熒光信號(hào)有熒光定量pcr儀中的。探測(cè)器接受檢測(cè)。而dna反應(yīng)中的熒光是取決于它反應(yīng)中dna的含量。Dna含量就會(huì)，則藍(lán)色熒光強(qiáng)度越高。

熒光定量pcr的擴(kuò)增效率e多少算好？

ABI的儀器是靠近100%最好是，羅氏的是將近2最好是，這個(gè)要看具體詳細(xì)的機(jī)型。但是數(shù)值的它表示當(dāng)時(shí)很可能不一樣的，只不過(guò)換算公式之后當(dāng)然都是逼近100%建議。也就是每一輪擴(kuò)增技術(shù)循環(huán)后，產(chǎn)物的量加倍

rox內(nèi)參是什么？

ROX內(nèi)參染料，用于驅(qū)除信號(hào)本底以及效正孔之間有一種的熒光信號(hào)，大限度的能提高了體外擴(kuò)增的準(zhǔn)確性

內(nèi)參基因是就是為了平衡完全不同模板之間的差異，而ROX在不斷地的加熱退火過(guò)程中的熒光比較穩(wěn)定，用以做為體系中的陰性較正。

ROX不參與PCR反應(yīng)，僅除掉加樣誤差和儀器孔之間誤差作用。

內(nèi)標(biāo)的作用：內(nèi)標(biāo)探針與標(biāo)基因探針需要不同的熒光報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記，實(shí)際檢測(cè)內(nèi)標(biāo)有無(wú)算正常來(lái)監(jiān)測(cè)待測(cè)樣本中是否是更具PCR抑制細(xì)胞物，盡量避免PCR假陰性。

ROX的作用：應(yīng)用于精確調(diào)整加樣誤差和管間差異，便于日后儀器自動(dòng)出現(xiàn)分析報(bào)告熒光與內(nèi)參比熒光ROX的比值，使定量更準(zhǔn)

pcr檢測(cè)的背景值是什么？

我們象把熒光PCR的前15個(gè)循環(huán)信號(hào)充當(dāng)熒光本底信號(hào)（baseline，基線期），即樣本的螢光背景值和陰性對(duì)照的熒光值，測(cè)序的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋。

熒光閾值是在熒光基因擴(kuò)增曲線上人即設(shè)置的一個(gè)值，它可以設(shè)定在熒光信號(hào)指數(shù)基因擴(kuò)增階段任何區(qū)域上，熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的綠色熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍（機(jī)器自動(dòng)出現(xiàn)設(shè)置中）。我們?cè)谧鰺晒舛縋CR實(shí)驗(yàn)時(shí)，每天都區(qū)分手動(dòng)設(shè)置里，手動(dòng)啟動(dòng)設(shè)置中的原則要為0樣本的磷光背景值和陰性對(duì)照的熒光高了值，而要最好就是你選進(jìn)入到指數(shù)期的曾經(jīng)在階段，能夠的信號(hào)是熒光信號(hào)將近域值。