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環(huán)介導(dǎo)等溫擴增是一種新的核酸擴增方法。其特點是針對靶基因的6個區(qū)域設(shè)計了4個特異性引物,并通過PCR擴增DNA聚合酶(BST DNA聚合酶)。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的自然復(fù)制過程,其特異性取

環(huán)介導(dǎo)等溫擴增是一種新的核酸擴增方法。其特點是針對靶基因的6個區(qū)域設(shè)計了4個特異性引物,并通過PCR擴增DNA聚合酶(BST DNA聚合酶)。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的自然復(fù)制過程,其特異性取決于靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火和延伸三個基本反應(yīng)步驟組成:①模板DNA變性:將模板DNA加熱到93℃一定時間后,將模板DNA的雙鏈或PCR擴增形成的雙鏈DNA解離成單鏈,與引物結(jié)合為下一輪反應(yīng)做準備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA加熱變性為單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對;③引物延伸:DNA在Taq的作用下以dNTP為原料,靶序列為模板,根據(jù)堿基互補配對和半保留復(fù)制的原理,合成了與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈。重復(fù)變性-退火-延伸的三個過程可以得到更多的“半保留復(fù)制鏈”,并且這種新的復(fù)制鏈可以用于下一個周期,需要2-4分鐘和2-3小時來擴增目標基因