質(zhì)粒與目的基因?yàn)槭裁磿?huì)反向連接？A.質(zhì)粒是基因工程中的載體，一般用于將目標(biāo)基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中，有誤；B和紫外線不是基因工程的工具，一般用于誘導(dǎo)基因突變，有誤；C和DNA連接酶一般用于連接目標(biāo)基因和質(zhì)

質(zhì)粒與目的基因?yàn)槭裁磿?huì)反向連接？

A.質(zhì)粒是基因工程中的載體，一般用于將目標(biāo)基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中，有誤；B和紫外線不是基因工程的工具，一般用于誘導(dǎo)基因突變，有誤；C和DNA連接酶一般用于連接目標(biāo)基因和質(zhì)量切割形成重組質(zhì)粒，具有C錯(cuò)；D和限制性內(nèi)切酶能識(shí)別雙鏈DNA分子的一個(gè)特定核苷酸序列，它能破壞每個(gè)鏈特定部分兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵，一般用于基因工程中提取目標(biāo)基因。D是正確的。然而，如果使用一種酶，載體必須去磷酸化。否則，大多數(shù)載波自連接形成空載波。如果載體去磷酸化，片段將以陽性和陰性兩種方式插入載體。如果片段相對(duì)較小，則片段很可能會(huì)串聯(lián)多次，然后連接到載體中。目的基因被切割后，產(chǎn)生粘端。如果靶基因反轉(zhuǎn)180°與質(zhì)粒連接或不連接，則產(chǎn)生兩個(gè)完全不同的質(zhì)粒

限制性內(nèi)切酶的大多數(shù)識(shí)別位點(diǎn)是反向?qū)ΨQ的。如果只使用相同的酶，則獲得的片段的兩個(gè)末端序列是相同的。連接時(shí)，它是隨機(jī)的。不僅會(huì)發(fā)生反向連接，還會(huì)發(fā)生串聯(lián)連接。

在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，我們將用兩種酶分別切割目標(biāo)基因和質(zhì)粒的上下游，以保證連接時(shí)目標(biāo)片段和質(zhì)粒片段的方向性。例如，ECOR I用于上游，BamH用于下游。

您對(duì)“目標(biāo)基因和質(zhì)粒不應(yīng)被同一限制性內(nèi)切酶切割”的理解意味著上游和下游使用相同的限制性內(nèi)切酶，但不是上游和下游都使用相同的限制性內(nèi)切酶。

除了一些特殊情況外，我們還要用一種酶來切斷上下游，這會(huì)導(dǎo)致大量的反向連接。連接后，我們需要選擇更多的克隆進(jìn)行識(shí)別。

個(gè)人意見，僅供參考，祝您一切順利

為什么同種限制酶切割形成的末端相同時(shí)目的基因與質(zhì)粒會(huì)反向連接，為什么會(huì)有反向連接這種情況。目的基因？

目的基因具有從起始密碼子到終止密碼子的方向性，只有通過正連接才能獲得正確的克隆，構(gòu)建的載體才能正確表達(dá)目的蛋白。

為什么同種限制酶切割形成的末端相同時(shí)目的基因與質(zhì)粒會(huì)反向連接，為什么會(huì)有反向連接這種情況。目的基因？

質(zhì)粒有自己的閱讀順序。如果目標(biāo)基因反向連接，則根據(jù)質(zhì)粒的閱讀順序，它不是目標(biāo)基因。相反，它是目標(biāo)基因。當(dāng)然，它不能表達(dá)目的基因的蛋白質(zhì)

基因表達(dá)載體含有基因表達(dá)所需的成分，如35S啟動(dòng)子等。

如果連接是反向的，當(dāng)然不能表示。