構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的？有利于靶基因進入受體細(xì)胞，有利于靶基因在受體細(xì)胞中的穩(wěn)定存在和表達。重組質(zhì)粒構(gòu)建是一種常見的分子生物學(xué)方法，但它只是最基本的方法。一般來說，一周內(nèi)同時構(gòu)建三到兩組質(zhì)粒是沒有問題的。

構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的？

有利于靶基因進入受體細(xì)胞，有利于靶基因在受體細(xì)胞中的穩(wěn)定存在和表達。重組質(zhì)粒構(gòu)建是一種常見的分子生物學(xué)方法，但它只是最基本的方法。一般來說，一周內(nèi)同時構(gòu)建三到兩組質(zhì)粒是沒有問題的。在國內(nèi)先進的實驗中，大多是由實驗者完成的。但仍有一些基本技能需要掌握。在這里我想和大家分享一下我的經(jīng)驗，這也是我近年來在一線工作中積累的經(jīng)驗，以期為顧友提供參考，讓大家在實驗中避免走彎路。內(nèi)容包括：1）克隆基因的限制性位點；2）載體的限制性位點；3）連接片段的濃度比。同時，我也盡量用一些例子來說明上述問題。1、 1. 克隆位點的選擇。首先，我們需要掃描目標(biāo)基因的限制性位點并列出限制性位點。與質(zhì)粒多克隆位點相比，選擇的克隆位點必須是目的基因中不含的限制性位點。這是常識。我不重復(fù)了。2保護的目的。在PCR引物的設(shè)計中，通常在引入限制位點后加入保護堿基，這是眾所周知的。但是，新手可能會忽略受保護堿基的數(shù)量。這種忽視可能會極大地影響后續(xù)的實驗進度。一般來說，普通的核酸內(nèi)切酶只加入兩個保護性堿基，其核酸內(nèi)切酶反應(yīng)就可以正常進行；而有一種核酸內(nèi)切酶，只加入兩個保護性堿基，其核酸內(nèi)切酶反應(yīng)就不能正常進行，這是因為核酸內(nèi)切酶不能與DN片段正常結(jié)合。例如，ndei屬于這一類。它至少需要添加6個保護基，常用的印地語也需要3個。

重組質(zhì)粒構(gòu)建的注意事項？

限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶。構(gòu)建重組質(zhì)粒，首先需要切割原完整質(zhì)粒，必須使用限制性內(nèi)切酶；然后將目的基因片段連接到切割的質(zhì)粒上，重組質(zhì)粒需要重新連接，必須使用DNA連接酶。

構(gòu)建重組質(zhì)粒必須使用哪兩種酶？

重組質(zhì)粒：有一個目的基因，有一個質(zhì)粒，然后兩者通過酶連接。-（重組質(zhì)粒是一種作用、方法，不是名詞）AB是“重組質(zhì)粒”，是用重組質(zhì)粒的方法制成的。BB沒有質(zhì)粒，不是“重組質(zhì)?！盇A沒有靶基因，不是“重組質(zhì)?！?/p>