外源性基因與載體的連接方式哪四種？第一個是t，a連接，現(xiàn)在常用的是t載體，一般PCR產(chǎn)物兩端都加a，這樣t，a匹配，T4連接酶就可以把它們連接在一起。二是黏稠酶消化位點連接，將載體與外源基因用同一酶消

外源性基因與載體的連接方式哪四種？

第一個是t，a連接，現(xiàn)在常用的是t載體，一般PCR產(chǎn)物兩端都加a，這樣t，a匹配，T4連接酶就可以把它們連接在一起。二是黏稠酶消化位點連接，將載體與外源基因用同一酶消化（雙酶消化，或單酶消化均可）回收相應(yīng)片段，用黏稠端酶消化成第三、平端連接，也可用T4連接酶消化，但結(jié)扎效率很低。第四，同源重組，利用一個含有目的基因的載體a和另一個載體B共同轉(zhuǎn)染（轉(zhuǎn)化）宿主，可以通過同源重組產(chǎn)生含有目的基因的載體B。它主要用在病毒載體和重組載體上你用的是T4連接酶，對嗎？對于平端連接，必須使用大量的目標(biāo)碎片來競爭載體自連接。一般來說，碎片與載體的摩爾比必須大于8:1，以實現(xiàn)更高的連接效率。在10μL體系中，使用0.5μL T4連接酶。然后你以10:1的摩爾比加入你的碎片和載體，然后用水補(bǔ)充體積。另外，導(dǎo)致平端連接失效的主要原因是載體的自連接非常嚴(yán)重。可以用磷酸酶對載體進(jìn)行處理，對載體進(jìn)行去磷酸化，即去除載體末端的磷酸基團(tuán)，這樣可以大大降低載體的自連接概率，提高連接成功率。