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    轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得數(shù)據(jù)怎么判斷kegg富集顯著性 提取樣品總RNA后,用帶有Oligo(dT)的磁珠富集真核生物mRNA(若為原核生物,則用試劑盒去除rRNA后進(jìn)入下一步)。

    加入fragmentation buffer將mRNA打斷成短片段,以mRNA為模板,用六堿基隨機(jī)引物(random hexamers)合成第一條cDNA鏈,然后加入緩沖液、dNTPs、RNase H和DNA polymerase I合成第二條cDNA鏈,在經(jīng)過QiaQuick PCR試劑盒純化并加EB緩沖液洗脫之后做末端修復(fù)、加A并連接測(cè)序接頭,然后用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行片段大小選擇,最后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,建好的測(cè)序文庫(kù)用Illumina HiSeq? 2000進(jìn)行測(cè)序。