如何確定定點(diǎn)突變的突變位？如何利用PCR進(jìn)行定點(diǎn)突變以及如何成功檢測(cè)突變，就是在引物上設(shè)計(jì)突變位點(diǎn)（通?？拷锏闹行模?，使陽(yáng)性和陰性引物互補(bǔ)性最好，然后將普通PCR擴(kuò)增前后的兩個(gè)片段回收。將兩個(gè)片段

如何確定定點(diǎn)突變的突變位？

如何利用PCR進(jìn)行定點(diǎn)突變以及如何成功檢測(cè)突變，就是在引物上設(shè)計(jì)突變位點(diǎn)（通常靠近引物的中心），使陽(yáng)性和陰性引物互補(bǔ)性最好，然后將普通PCR擴(kuò)增前后的兩個(gè)片段回收。將兩個(gè)片段混合，重疊PCR擴(kuò)增。通過(guò)在中間引物上設(shè)計(jì)突變，可以實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)突變。重疊引物PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變是一種在基因特定位點(diǎn)引入特異性突變的快速有效技術(shù)。該技術(shù)利用末端互補(bǔ)的引物使PCR產(chǎn)物形成重疊鏈，使不同來(lái)源的擴(kuò)增片段在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過(guò)重疊鏈的延伸進(jìn)行重疊拼接。