普通pcr引物設(shè)計(jì)和熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)的區(qū)別？實(shí)時(shí)定量引物設(shè)計(jì)的要求比較高，可以按照常用的引物設(shè)計(jì)方法進(jìn)行，但擴(kuò)增片段不宜過(guò)大，最好在250bp-100bp之間。同時(shí)，要保證這對(duì)引物的絕對(duì)特異性，

普通pcr引物設(shè)計(jì)和熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)的區(qū)別？

實(shí)時(shí)定量引物設(shè)計(jì)的要求比較高，可以按照常用的引物設(shè)計(jì)方法進(jìn)行，但擴(kuò)增片段不宜過(guò)大，最好在250bp-100bp之間。同時(shí)，要保證這對(duì)引物的絕對(duì)特異性，因?yàn)槿绻a(chǎn)生非特異性擴(kuò)增，模板量就不能準(zhǔn)確測(cè)定，熒光定量PCR擴(kuò)增區(qū)相對(duì)較小，約200bp，一般以cDNA為模板。如果不注意引物的設(shè)計(jì)，很可能落入同一外顯子中cDNA和基因組DNA都會(huì)給出相同的信號(hào)，也就是說(shuō)會(huì)出現(xiàn)定量錯(cuò)誤。如果引物與內(nèi)含子交叉，cDNA會(huì)發(fā)出信號(hào)，而基因組DNA由于不能完全配對(duì)而沒(méi)有信號(hào)，從而避免了基因組DNA的影響