如何設(shè)計(jì)擴(kuò)增基因全長的引物？你應(yīng)該使用嵌套PCR來做這個(gè)實(shí)驗(yàn)。無論是在反轉(zhuǎn)錄前提取RNA還是直接從DNA中提取基因，考慮到模板的復(fù)雜性，都應(yīng)該使用巢式PCR。建議從靶基因的上下游設(shè)計(jì)一個(gè)外引物，然后根

如何設(shè)計(jì)擴(kuò)增基因全長的引物？

你應(yīng)該使用嵌套PCR來做這個(gè)實(shí)驗(yàn)。無論是在反轉(zhuǎn)錄前提取RNA還是直接從DNA中提取基因，考慮到模板的復(fù)雜性，都應(yīng)該使用巢式PCR。建議從靶基因的上下游設(shè)計(jì)一個(gè)外引物，然后根據(jù)靶基因的上下游設(shè)計(jì)一個(gè)內(nèi)引物。外引物不在目的基因上，但可以在目的基因上下游100bp以內(nèi)，利用引物設(shè)計(jì)可以找到最佳引物，提高首次PCR的成功率。第一個(gè)PCR產(chǎn)物用作第二個(gè)PCR的模板，因此如果產(chǎn)生了正確大小的P帶，就可以確定它是您的目標(biāo)帶。由于兩種特異性擴(kuò)增和大小正確，總特異性極高。另外，在第二個(gè)PCR過程中，模板是第一個(gè)PCR的產(chǎn)物，并且成分單一。不管內(nèi)部底漆有多差，都沒有問題。這避免了“如果不能在CDs區(qū)域的兩端設(shè)計(jì)底漆怎么辦？”這就是問題所在。你明白嗎？歡迎提問！