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引物怎么自己設(shè)計呢 qpcr買試劑盒還要設(shè)計引物嗎?

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qpcr買試劑盒還要設(shè)計引物嗎?

QPCR與普通PCR相同,需要緩沖液、dNTP、Taq酶、引物、模板、水,QPCR試劑盒是將緩沖液、dNTP、Taq酶混合在一起,也需要引物和模板。引物可以添加到綠色人口的官方帳戶和免費熒光定量PCR引物由專業(yè)人士提供。

為什么QPCR引物設(shè)計在跨外顯子的接頭區(qū)?

提取RNA時,可能會與DNA混合。當進行PCR時,引物可能與DNA結(jié)合。如果設(shè)計的引物跨越兩個外顯子,它們就不會與DNA結(jié)合。因為在DNA中,外顯子通常由內(nèi)含子分開。然而,在轉(zhuǎn)錄的mRNA中,內(nèi)含子被切斷,外顯子連接在一起。因此,用這種方法設(shè)計的引物可以避免與DNA結(jié)合,只與RNA結(jié)合。我們避免基因組擴增。當然,為了避免基因組擴增,我們也可以用DNA酶來處理RNA,破壞可能存在的DNA。這樣,底漆的設(shè)計就不重要了。

怎么設(shè)計擴全長的引物?

1. 確定siRNA的設(shè)計位點是否具有特異性

2。你正在研究的基因是否有多個拼接

3。qPCR的引物是否設(shè)計在全長蛋白的剪接上

如果siRNA的設(shè)計位點在亞型A上,而檢測到的蛋白是由亞型B表達的,則qPCR的結(jié)果可能與蛋白表達的變化不一致。