利用綠色熒光蛋白（GFP）反映RNA干擾（RNAi）載體的轉(zhuǎn)染效率來(lái)研究RNA干擾載體的抑制作用RNA干擾（RNAi）是近年來(lái)生命科學(xué)領(lǐng)域最重要的發(fā)現(xiàn)之一。是指小的雙鏈RNA能夠特異性地降解或抑制同源

利用綠色熒光蛋白（GFP）反映RNA干擾（RNAi）載體的轉(zhuǎn)染效率來(lái)研究RNA干擾載體的抑制作用

RNA干擾（RNAi）是近年來(lái)生命科學(xué)領(lǐng)域最重要的發(fā)現(xiàn)之一。是指小的雙鏈RNA能夠特異性地降解或抑制同源mRNA的表達(dá)，從而抑制或關(guān)閉特定基因的表達(dá)的現(xiàn)象。只要知道某一疾病的致病基因，就可以設(shè)計(jì)針對(duì)該基因mRNA的小干擾RNA（siRNA），抑制或阻斷致病基因的表達(dá)，從而達(dá)到治療該疾病的目的。顯然，從理論上講，幾乎所有的疾病都可以用siRNA來(lái)治療，包括癌癥、傳染病、遺傳病等等。因此，RNAi受到了學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。它是目前生命科學(xué)研究最熱門(mén)的領(lǐng)域，也是未來(lái)新藥開(kāi)發(fā)最具前景的領(lǐng)域。此外，RNAi技術(shù)還可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)、林、牧、漁業(yè)等領(lǐng)域進(jìn)行育種、篩選和疾病治療。由此可見(jiàn)，RNAi應(yīng)用廣泛，市場(chǎng)發(fā)展空間巨大。

然而，由于RNAi現(xiàn)象剛剛發(fā)現(xiàn)14年，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)有效的siRNA載體，極大地限制了RNAi的應(yīng)用，包括實(shí)驗(yàn)研究和藥物開(kāi)發(fā)。目前市場(chǎng)上主流的siRNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)體，它可以在體外將siRNA轉(zhuǎn)染到多種細(xì)胞系中，但對(duì)原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效果不是很好。由于它是一種脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞有一定的毒性。然而，英格恩生物公司開(kāi)發(fā)了一種新的方法。轉(zhuǎn)染載體的材料不是傳統(tǒng)的脂質(zhì)體，而是納米聚合物。大多數(shù)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)90%以上。在許多原代細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染效果也較好。另外，公司的體內(nèi)RNA轉(zhuǎn)染試劑entranster in vivo，與核酸混合后，可以注射到動(dòng)物體內(nèi)完成動(dòng)物體內(nèi)RNA干擾實(shí)驗(yàn)，非常方便，是動(dòng)物體內(nèi)RNA干擾實(shí)驗(yàn)的一項(xiàng)新創(chuàng)新。

在RNAi實(shí)驗(yàn)中,GFP干擾組的作用是什么？

RNAi是指由與靶基因同源的雙鏈RNA誘導(dǎo)的特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默。其作用機(jī)制是dsRNA被特異性核酸酶降解產(chǎn)生小干擾RNA（siRNA）。這些siRNAs與同源靶RNA互補(bǔ)結(jié)合，通過(guò)特異酶降解靶RNA，抑制和下調(diào)基因表達(dá)。當(dāng)外源基因如RNA干擾編輯病毒基因、人工轉(zhuǎn)移基因和轉(zhuǎn)座子隨機(jī)整合到宿主細(xì)胞基因組中并被宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄時(shí)，往往會(huì)產(chǎn)生一些dsrna。它已成為基因治療和基因結(jié)構(gòu)與功能研究的一種快速有效的方法。學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）、核酸與基因（二級(jí)學(xué)科）。目前，RNAi的作用機(jī)制主要在線蟲(chóng)、果蠅和擬南芥中闡明。由于RNA病毒入侵、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)錄、基因組反轉(zhuǎn)錄和外源基因?qū)?，DsRNA分子可以在細(xì)胞中出現(xiàn)。當(dāng)各種原因產(chǎn)生的dsRNA出現(xiàn)在細(xì)胞中時(shí)，細(xì)胞中的組蛋白特異性蛋白復(fù)合物可以識(shí)別dsRNA。在這一階段，rde-1、rde-4和dsRNA特異性內(nèi)切酶Dicer參與rde-1、4編碼蛋白的識(shí)別，引導(dǎo)dsRNA與Dicer結(jié)合。然后Dicer將dsRNA展開(kāi)并將其切割成21-25nt的siRNA。

RNA干擾技術(shù)的機(jī)制是怎樣的？

RNA干擾（RNAi）是指外源性或內(nèi)源性雙鏈RNA（dsRNA）引起同源mRNA特異性降解進(jìn)入細(xì)胞，抑制相應(yīng)基因的表達(dá)，表現(xiàn)出特異性基因缺失的現(xiàn)象。

RNA作用機(jī)制主要在線蟲(chóng)和果蠅等生物中闡明。病毒感染、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)錄和外源基因誘導(dǎo)RNAi機(jī)制。結(jié)果，當(dāng)病毒被清除時(shí)，轉(zhuǎn)座子的表達(dá)被阻斷，外源基因被阻斷，同源細(xì)胞基因組中的基因表達(dá)也被阻斷。

RNA干擾作為一種古老而進(jìn)化上保守的基因沉默機(jī)制，在細(xì)胞抵御病毒感染、修復(fù)遺傳損傷和調(diào)節(jié)正?；蚬δ艿确矫姘l(fā)揮著重要作用。

RNA干擾技術(shù)有哪些作用？

RNAi（RNA干擾）通過(guò)引入與靶基因mRNA部分片段互補(bǔ)的21bp雙鏈RNA，可有效誘導(dǎo)靶基因沉默。在Dicer的作用下，單鏈或雙鏈轉(zhuǎn)錄酶抑制目的基因的轉(zhuǎn)錄。