PCR引物設(shè)計時有哪些注意事項？引物設(shè)計參數(shù)：a引物長度一般在20bp左右，上下游引物堿基長度不要相差超過4個堿基。b引物退火溫度一般在58度，不同軟件TM使用不同的算法，primer3，primer

PCR引物設(shè)計時有哪些注意事項？

引物設(shè)計參數(shù)：a引物長度一般在20bp左右，上下游引物堿基長度不要相差超過4個堿基。b引物退火溫度一般在58度，不同軟件TM使用不同的算法，primer3，primer5，primer6，primerexpress等一般可以設(shè)置在55-58度，beacondesign可以設(shè)置在65左右。cGC含量一般沒什么特殊要求，40-60最好，如果不好設(shè)計，30-80也是可以的。d產(chǎn)物長度在100-150，80-200也可以，不要在50bp左右，那樣和引物二聚體不易區(qū)分，超過200bp可能會影響PCR擴增效率。e軟件給出的引物不能有發(fā)卡結(jié)構(gòu)和超過3-4個堿基的匹配，特別是3`端不能有堿基匹配，那樣更容易形成二聚體。f引物設(shè)計好以后，在NCBI上做一個primer-blast，檢測一下是否有非特異性擴增。