dna印跡技術(shù)的操作程序？Southdna探針片段是什么？DNA探針是用同位素、生物素等標(biāo)記的特定DN段。，可以大到寄生蟲基因組DNA，小到20個(gè)堿基。當(dāng)DNA探針和待檢測的未標(biāo)記的單鏈DNA(或RN

dna印跡技術(shù)的操作程序？

South

dna探針片段是什么？

DNA探針是用同位素、生物素等標(biāo)記的特定DN段。，可以大到寄生蟲基因組DNA，小到20個(gè)堿基。

當(dāng)DNA探針和待檢測的未標(biāo)記的單鏈DNA(或RNA)根據(jù)堿基序列互補(bǔ)結(jié)合時(shí)，兩個(gè)單鏈DNA通過氫鍵連接，形成標(biāo)記的DNA-DNA(或標(biāo)記的DNA-RNA)的雙鏈雜交分子。

未配對的探針經(jīng)洗滌和稀釋后，用檢測系統(tǒng)(放射自顯影或酶檢測等)檢測雜交結(jié)果。).

由于DNA分子堿基互補(bǔ)的準(zhǔn)確性，單鏈DNA探針只與樣品中變性的DNA單鏈雜交，這就決定了探針的特異性。用放射性同位素(如32P)或生物素標(biāo)記探針，同時(shí)使雜交試驗(yàn)高度靈敏。

用什么標(biāo)記追蹤蛋白質(zhì)分子合成，加工過程？

同位素示蹤技術(shù)一般用于示蹤活細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成和分泌的過程?；静襟E如下:

①在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入放射性同位素標(biāo)記的氨基酸(3H-亮氨酸)，這些與相應(yīng)的未標(biāo)記氨基酸具有相同化學(xué)性質(zhì)的標(biāo)記分子在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)(稱為脈沖標(biāo)記)；

(2)除去培養(yǎng)液并洗滌細(xì)胞，然后在含有未標(biāo)記氨基酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。已進(jìn)入細(xì)胞的標(biāo)記氨基酸會被蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)利用為原料，混合成新合成的蛋白質(zhì)；

③每隔一定時(shí)間取出一定數(shù)量的細(xì)胞，用電鏡放射自顯影檢測不同時(shí)間標(biāo)記的特異性蛋白的位置。通過比較不同時(shí)間取樣的細(xì)胞的電鏡照片，可以了解細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成和分泌的動態(tài)過程。

dna印跡分析的正確操作步驟是？

操作步驟:

1.用6×SSC的固定化DNA潤濕膜。

2.將膜的DNA面朝上放入雜交管中，ATP溶液量約為1 ml/cm2，在68℃的雜交爐中滾動3小時(shí)。

3.預(yù)雜交結(jié)束時(shí)，將DNA探針在100℃變性10分鐘，并置于冰中。

四將雜交管中的APH溶液倒出，換成等體積的預(yù)熱過的APH溶液(68℃)，加入變性探針，在68℃滾動雜交過夜。

5.倒出APH溶液，加入同體積的2×SSC/0.1%SDS，室溫下滾動孵育10分鐘。5分鐘后更換膜清洗液。

6.用0.2×SSC/0.1%SDS替換上述膜清洗液，室溫下滾動孵育10 min后更換膜清洗液。

7.如有必要，用0.2×SSC/0.1%SDS在42℃下沖洗膜兩次，每次15分鐘，松緊適度。

8.如有必要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS下，高緊密度清洗膜15分鐘兩次。

9.倒掉最后一次洗片液，室溫下用2×SSC沖洗膠片，吸干多余的液體，然后用塑料薄膜包裹，放射自顯影。