如何使用超速離心機(jī)濃縮慢病毒？你好，慢木馬病毒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞的具體操作方法追加：1、慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前18-24小時(shí)，將貼壁血細(xì)胞以115×^5/孔鋪到24測(cè)量管中。使組織細(xì)胞在慢蠕蟲病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染時(shí)的人數(shù)為

如何使用超速離心機(jī)濃縮慢病毒？

你好，慢木馬病毒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞的具體操作方法追加：1、慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前18-24小時(shí)，將貼壁血細(xì)胞以115×^5/孔鋪到24測(cè)量管中。

使組織細(xì)胞在慢蠕蟲病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染時(shí)的人數(shù)為2×2^5/孔以內(nèi)。2、第二天，用含有6μg/mlpuc19的2ml還新鮮液體培養(yǎng)基重命名原液體培養(yǎng)基，加入適量即可病毒木馬培養(yǎng)基。37攝氏度液體培養(yǎng)。3、(對(duì)polybrene毒性敏感的細(xì)胞內(nèi)選作此詳細(xì)步驟)5小時(shí)后組建2ml還新鮮培養(yǎng)液以稀釋后裂解液。4、一直重視培養(yǎng)24小時(shí)，用新鮮的蘋果培養(yǎng)基重命名所含的病毒的培養(yǎng)液。5、再培養(yǎng)和訓(xùn)練。如果沒(méi)有慢木馬病毒含有螢光蛋白，好象質(zhì)粒轉(zhuǎn)染36小時(shí)后而且明顯綠色熒光表達(dá)，72小時(shí)后非常很明顯。如需FACS檢測(cè)檢測(cè)共轉(zhuǎn)染速度和效率，可在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后72-965個(gè)小時(shí)接受。要是慢病毒木馬所含的抗性基因組合因此必須加藥篩選后，是可以在細(xì)胞系3-4天后結(jié)束加藥。二、慢病毒共轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、在215×^5/ml懸浮血細(xì)胞中組建polybrene至6μg/ml和不能過(guò)量病毒，一定混合均勻后。37攝氏度誘導(dǎo)培養(yǎng)。也可以200g室溫離心5小時(shí)(選作，部分難細(xì)胞系的細(xì)胞系按結(jié)構(gòu)此步驟也可以想提高質(zhì)粒轉(zhuǎn)染工作效率)。2、(對(duì)裂解液毒性很大敏感的組織細(xì)胞選作此流程)2小時(shí)后(或減壓蒸餾已經(jīng)結(jié)束后)一并加入等它的體積新鮮培養(yǎng)基以水稀釋polybrene。3、再重視培養(yǎng)3-4天。后邊視細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況可連續(xù)傳代或換液。