全基因組測(cè)序有哪三種方法？三種方法:基因組裝、全外顯子測(cè)序(Wngs二代測(cè)序的常用方法？焦磷酸測(cè)序、合成測(cè)序、連接測(cè)序和離子半導(dǎo)體測(cè)序。第二代DNA測(cè)序技術(shù)的操作流程？操作過(guò)程如下:1.測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建

全基因組測(cè)序有哪三種方法？

三種方法:基因組裝、全外顯子測(cè)序(W

ngs二代測(cè)序的常用方法？

焦磷酸測(cè)序、合成測(cè)序、連接測(cè)序和離子半導(dǎo)體測(cè)序。

第二代DNA測(cè)序技術(shù)的操作流程？

操作過(guò)程如下:

1.測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建

首先制備基因組，然后將DNA隨機(jī)斷裂成幾百個(gè)堿基或更少的小片段，并在兩端加入特殊的接頭。如果是轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，文庫(kù)的構(gòu)建相對(duì)麻煩。RN段化后，需要反向轉(zhuǎn)化為cDNA，然后加入接頭，或者先將RNA反向轉(zhuǎn)化為cDNA，再將片段加入接頭。

2.錨泊橋

Solexa測(cè)序反應(yīng)是在一個(gè)被稱為流動(dòng)池的玻璃管中進(jìn)行的，這個(gè)玻璃管被細(xì)分為八個(gè)泳道，每個(gè)泳道的內(nèi)表面有無(wú)數(shù)個(gè)固定的單鏈頭。將上述步驟中獲得的具有接頭的DN段變性為單鏈，然后與測(cè)序通道上的接頭引物結(jié)合，形成橋結(jié)構(gòu)，用于隨后的預(yù)擴(kuò)增。

3.前置放大

加入未標(biāo)記的dNTP和普通Taq酶進(jìn)行固相橋PCR擴(kuò)增，將待檢測(cè)的單鏈橋片段擴(kuò)增為雙鏈橋片段。通過(guò)變性，互補(bǔ)的單鏈被釋放并錨定在附近的固體表面。通過(guò)不斷循環(huán)，在流動(dòng)池的固體表面將獲得數(shù)百萬(wàn)簇待檢測(cè)的雙鏈片段。

4.單堿基延伸測(cè)序

將四種熒光標(biāo)記的dNTP、DNA聚合酶和接頭引物加入測(cè)序的流動(dòng)池中進(jìn)行擴(kuò)增。當(dāng)每個(gè)測(cè)序簇延伸其互補(bǔ)鏈時(shí)，每個(gè)熒光標(biāo)記的dNTP可以釋放相應(yīng)的熒光。測(cè)序儀捕捉熒光信號(hào)，通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成測(cè)序峰，從而獲得待測(cè)片段的序列信息。

5.數(shù)據(jù)分析

嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，這一步可以 t不能算作排序操作流程的一部分，但只有通過(guò)這一步的前期工作才有意義。測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)是長(zhǎng)度只有幾十個(gè)堿基的序列。應(yīng)該通過(guò)生物信息學(xué)工具將這些短序列組裝成重疊群甚至全基因組的框架，或者將這些序列與現(xiàn)有的基因組或相似物種的基因組序列進(jìn)行比較，并進(jìn)行進(jìn)一步分析，以獲得有生物學(xué)意義的結(jié)果。